طراحی پلاسمید یوکاریوتی بیان کننده اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G ویروس تب بی دوام گاوی در سلول های جنینی کلیه انسان
نویسندگان
1 دانشجوی دکتری ژنتیک و اصلاح نژاد دام، دانشکده ی علوم دامی و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان
2 استاد گروه علوم دامی، دانشکده ی علوم دامی و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان
3 استادیار پژوهشی مدیریت کنترل کیفی فرآورده های بیولوژیک، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
4 استاد گروه پاتوبیولوژی، دانشکده ی دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران اهواز
5 دانشیار گروه علوم دامی، دانشکده ی علوم دامی و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان
6 استاد گروه علوم دامی، دانشکده ی علوم دامی و صنایع غذایی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان
doi
10.22055/ivj.2017.60443.1793چکیده
گلیکوپروتئین G ویروس تب بیدوام گاوی (BEFV) به عنوان یک نامزد احتمالی جهت ایمنسازی حیوانات در برابر بیماری تب بیدوام شناخته شده است. در سالهای اخیر، این پروتئین جهت تولید یک واکسن نوترکیب مورد توجه ویژه بوده است. هدف از مطالعهی حاضر، ساخت یک پلاسمید یوکاریوتی بیان کنندهی اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G ویروس تب بیدوام گاوی، برای استفاده به عنوان یک واکسن DNA احتمالی در مطالعات آینده بود. به این منظور، اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G در ناقل بیانی یوکاریوتی pEGFP-N1، تحت کنترل پروموتر سیتومگالوویروس انسانی (CMV) کلون شد. سپس سازهی نوترکیب pEGFPN1-G1 به سلولهای جنینی کلیهی انسان (HEK 293) انتقال یافت و کارایی بیان پروتئین با استفاده از روشهای ایمونوفلورسنس غیرمستقیم (IFA) و ایمنوبلات بررسی شد. مشاهدهی فلورسنس درون سیتوپلاسم سلولهای ترانسفکت شده و ظهور یک باند مجزا با وزن مولکولی تقریبی 26 کیلو دالتون در آزمایش ایمنوبلات در واکنش به یک سرم موش ضد پروتئین G1، نشاندهندهی بیان موفق پروتئین G1 توسط این سازهی نوترکیب در سلولهای میزبان بود.
