فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

مقدمه: پروتئین تنظیمی Nef و همچنین  پروتئین های ساختاری MPER و V3 ویروس HIV-1 از اهداف مهم در مطالعات واکسن به شمار می روند. از این رو در مطالعه حاضر، پروتئین فیوژن Nef-MPER-V3 در سیستم بیانی پروکاریوتی کلون و بیان شد تا به عنوان کاندید مناسب در مطالعات آتی واکسن مورد ارزیابی قرار گیرد.روش کار: توالی ژن Nef-MPER-V3  سنتز و توسط آنزیم های NotI /HindIII به داخل وکتور pET-28a الحاق شد. سپس، بیان پروتئین نوترکیب در سیستم بیانی BL21(DE3) انجام شد. به منظور بهینه سازی بیان، فاکتورهایی نظیر زمان القاء، غلظت IPTG و دانسیته نوری (OD) مورد ارزیابی قرار گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون  Ni-NTA agarose تخلیص و با استفاده از SDS-PAGE 12% ارزیابی شد و نهایتا، توسط وسترن بلات تایید شد.یافته ها: ژن هدف با موفقیت در وکتور بیانی کلون شد. بهترین شرایط بیان شامل: 2 میلی مولار IPTG، کدورت نوریOD600nm=0.7  و  رشد به مدت پنج ساعت پس از القاء تعیین شد. پروتئین نوترکیب به وسیله کروماتوگرافی تمایلی تحت شرایط دناتوره و با استفاده از اوره  با غلظت حدود 300 میکروگرم در میلی لیتر تخلیص شد. پروتئین فیوژن تخلیص شده به صورت یک باند واضح حدود 35 کیلودالتون در SDS-PAGE مشاهده و با استفاده از آنتی بادی ضد Nef در وسترن بلات آشکار شد. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که پروتئین نوترکیب NEF-MPER-V3 در سیستم بیانی BL21 (DE3)  به خوبی بیان شده و پروتئین تخلیص شده قابلیت استفاده در آزمایش های آتی به منظور ارزیابی ایمنوژنسیتی آن در موش که در حال انجام می باشد را دارد.