طراحی یک نانوحسگر زیستی با استفاده از آنتی بادی تثبیت شده روی نقاط کوانتومی و رودامین متصل به سیترینین جهت شناسایی مایکوتوکسین
نویسندگان
1 گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران
2 استاد تمام گروه مامایی و بیماری های تولید مثل دام، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران.
3 استاد قارچ شناسی.دپارتمان پاتوبیولوژی.واحد علوم و تحقیقات.دانشگاه آزاد اسلامی.تهران.ایران
4 استاد تمام گروه قارچ شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.
doi
چکیده
سیترینین متابولیت نفروتوکسیکی است که در حیوانات به کلیهها آسیب وارد میکند. لذا گسترش روشهای سمزدایی طی فرآیند مواد غذایی اهمیت دارد. کوانتومداتها با استفاده از یک منبع برانگیختگی با طولموج منفرد تحریکشده و پیکهای نشری متفاوتی را ارائه می دهند. در این تحقیق یک حسگر جدید بر اساس بیوکونژوگه شامل نانو کریستالهای نیمههادی کوانتوم دات و آنتیبادی ضد سیترینین با بکار بردن سیستم FRET(Fluorescence Resonance Energy Transfer)، برای تعیین میزان سموم سیترینین بکار گرفته شد. نانو کریستالهای نیمههادی یا کوانتومداتها (CdTe,CdTe/CdS)، با استفاده از روش رفلاکس با احیاء پودر تلوریوم و تحت جریان گاز ازت در آزمایشگاه سنتز شد. شدت فلورسانس کوانتوم داتها با استفاده از دستگاه اسپکتروفلوریمتری تعیین گردید. فعالیت آنتیبادی در نانوبیوکونژوگه نیز توسط دستگاه اسپکتروفلوریمتری سنجیده شد. سپس کونژوگه سیترینین-آلبومین نیز به ترکیب فلورسانس رودامین123 متصل شد که این واکنش ایمنولوژیکی با میل ترکیبی بالا بین آنتیبادی ضدسیترینین-کوانتومدات(دهنده) و لیبل سیترینین-رودامین123(گیرنده) بهعنوان فلوروفوراستفاده میشود. بعد از اضافه کردن محلول نانوبیوکونژوگه به داخل کووت که حاوی مقدار معینی بافر فسفات است، سیترینین با غلظتهای مختلف به آن اضافه شد و بعد از چند دقیقه تغییرات درشدت فلورسانس کوانتوم دات مشاهده گردید. کاهش منظم شدت فلورسانس با افزایش غلظت سیترینین به دست آمد. با توجه به آثار جمعی که مایکوتوکسینها بر سلامتی انسان و حیوان دارند تعیین میزان آلودگی مواد غذایی به مایکوتوکسینها ازجمله سیترینین با استفاده از نانوبیوسنسورها بهعنوان یک روش اختصاصی که ناشی از بکار بردن آنتیبادی مونوکلونال در آن است، عملکرد بهتری دارد. این نانوبیوسنسور طراحیشده برخلاف روشهای معمولی مثل ELISA و HPLC بهصورت هموژن، ساده، سریع، و ارزاناند و نیاز به مراحل جداسازی یا شستشوی زیاد ندارد.