بهینه سازی روش پی سی آر آشیانه ای در ردیابی باکتری سخت کشت Xylella fastidiosa
نویسندگان
1 دانشجوی دکتری، گروه گیاه¬پزشکی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
2 دانشیار، بخش بیماریهای گیاهی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مؤسسه تحقیقات گیاهپزشکی کشور، تهران، ایران
3 دانشیار، گروه گیاه¬پزشکی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
4 استاد، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان، سنندج، ایران
doi
چکیده
باکتری Xylella fastidiosa ، گونه ای سختکشت و محدود به آوند چوبی و عامل بروز بیماریهای جدی در گیاهان مختلف میباشد. تاکنون، اپیدمیهای وسیع و ریشهکن کننده در نقاط مختلف دنیا از این باکتری گزارش شده است. در دهه اخیر، علائم بیماریهای ناشی از X. fastidiosa در برخی از مناطق ایران روی درختان میوه از جمله بادام و انگور مشاهده شده است. میزان حساسیت، به صرفه بودن، مؤثر و قابل اعتماد بودن روشهای ردیابی X. fastidiosa در گیاهان و حشرات ناقل بهویژه در گیاهان چند ساله مانند انگور و پسته که جمعیت باکتری در آنها کم است، از نظر قرنطینه و مدیریت بیماری بسیار ضروری است. علیرغم دقت بالای ردیابی به روش PCR روی یاختههای کشت شده، کشت باکتری X. fastidiosa بسیار پرهزینه، زمانبر و با درصد موفقیت پایین گزارش شده است. بنابراین، به منظور بهینهسازی روشی سریع، کم هزینه و با دقت برای ردیابی باکتری سخترشد آوندی X. fastidiosa بهطور مستقیم از گیاه میزبان ، PCR آشیانهای دو مرحلهای، برای تکثیر ژنRNA polymerase gene 70S sigma طراحی شد. طبق نتایج بهدست آمده از این روش، از 2% کل نمونههای استخراج یافته، به 7% در نمونههای استخراج یافته بهبود یافت. بنابراین، استفاده از روش PCR آشیانهای میتواند روش جایگزین سریع، بهصرفه و مؤثر برای ردیابی مستقیم این باکتری از میزبان باشد.