تاثیر عصاره گیاه کالیگونوم بر کلونی‌زایی و تولید گونه‌های فعال اکسیژن در سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند

نویسندگان

1 گروه علوم درمانگاهی،دانشکده دامپزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی ، واحد علوم و تحقیقات، تهران ، ایران

2 گروه آناتومی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

3 گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.

4 گروه مامایی و بیماری‌های تولیدمثل دام، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران.

5 گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.

doi
10.22092/vj.2022.358637.1971
چکیده

این مطالعه به منظور بررسی اثر عصاره کالیگونوم بر تعداد کلونی‌ها، تولید گونه‌های فعال اکسیژن و بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوزیس در سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند انجام شد. در این پژوهش سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی موجود در غشاء پایه لوله‌های منی‌ساز از بیضه گوسفند نژاد افشاری با استفاده از مراحل هضم آنزیمی جداسازی شدند. نمونه‌ها‌ به چهار گروه تقسیم شدند. گروه شاهد شامل محیط پایه بود و در سه گروه بعدی به ترتیب تیمارهای H2O2 (30 میکرومولار)، کالیگونوم (10 میکروگرم در میلی‌لیتر) و کالیگونوم+H2O2 (30 میکرومولار H2O2 به همراه 10 میکروگرم در میلی‌لیتر کالیگونوم) به محیط پایه اضافه شدند. سلول‌ها به مدت سه هفته کشت داده شدند و میزان کلونیزاسیون در روزهای پنج و 14 و 21 پس از شروع کشت ارزیابی شدند. پس از پایان دوره کشت میزان تولید گونه‌های فعال اکسیژن و بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوزیس (BAX و BCL2) نیز ارزیابی شد. در روز 5 و 14 کشت، تعداد کلونی‌های اسپرماتوگونی در گروه‌های شاهد و کالیگونوم نسبت به دو گروه دیگر بیشتر بود (05/0≥P). در روز 21 کشت، بیشترین و کمترین تعداد کلونی‌های اسپرماتوگونی به‌ترتیب در گروه‌های کالیگونوم و H2O2 مشاهده شد (05/0≥P). کمترین و بیشترین درصد سلول‌های اسپرماتوگونی حاوی ROS و همچنین بیان ژن BAX و مقدار نسبت BAX/BCL2 به‌ترتیب در گروه‌های کالیگونوم و H2O2 مشاهده شد (05/0≥P). همچنین بیشترین مقدار بیان ژن BCL2 در سلول‌های اسپرماتوگونی گروه‌ کالیگونوم مشاهده شد (05/0≥P). در نتیجه استفاده از عصاره کالیگونوم در محیط کشت می‌تواند راهکاری تاثیرگذار در راستای بهبود کیفیت و کاهش بروز آپوپتوزیس در سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند طی مطالعات تحقیقاتی باشد.

کلیدواژه‌ها