فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

زمینه و هدف: اگزوتوکسین A فاکتور مهم در بیماریزایی سودوموناس آئروژینوزا بوده و خنثی سازی آن در مبارزه با عفونتهای ناشی از آن کمک کننده خواهد بود. بنابراین در این مطالعه بهینه سازی تولید و تخلیص اگزوتوکسین A (دومین I,II ) و ارزیابی اولیه آن بعنوان کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفنه است. مواد و روش کار: بعد از استخراج DNA از سودوموناس آئروژینوزای سویه PAO1 و تکثیر با PCR ، قطعه ژنی مورد نظر با اتصال به ناقل Pet22b به Escherichia coli BL21 (E.coli ) منتقل و بیان آن با روش SDS-Page بررسی گردید و پروتئین نوترکیب با روش افینیتی کروماتوگرافی تخلیص شد. واکنش آنتی ژنیک آن با آنتی بادی ضد اگزوتوکسین A و سرم بیماران مبتلا به عفونت سودوموناس آئروژینوزا با روش وسترن بلاتینگ بررسی گردید. یافته ها: بر اساس نتایج این مطالعه قطعه ژنی اگزوتوکسین A (دومین I,II ) سودوموناس آئروژینوزا با اندازه bp 1212 در ژل الکتروفورزمحصول PCR مشاهده گردید که مقایسه توالی ژن کلون شده با توالی ژن اگزوتوکسین سودوموناس آئروژینوزای سویه PAO1 ، صحت توالی را تایید کرد. بیان در E. coli BL21 باعث تولید پروتئین مورد نظر با اندازه تقریبی KD 45 گردید. بیان در شرایط مختلف نشان داد القای 4 ساعت با نیم میلی مولار IPTG در دمای C ˚ 28 بهترین شرایط تولید پروتئین با غلظت بالا بود . نتایج نشان داد این پروتئین در وسترن بلاتینگ با آنتی بادی ضد اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزای و سرم بیماران مبتلا به عفونت سودوموناس بخوبی واکنش نشان داد. نتیجه گیری: سیستم استفاده شده سیستم مناسبی برای تولید اگزوتوکسین A (دومین I,II ) نوترکیب است و می تواند برای تولید این پروتئین در مقیاس بالا مورد استفاده قرار گیرد. واژه های کلیدی: سودوموناس آئروژینوزا، کاندید واکسن، اگزوتوکسین A ، واکسن نوترکیب