ارزیابی آنتی ژن های خام پروتواسکولکس و مایع کیست هیداتیک برای تشخیص سرولوژیکی هیداتیدوز در گوسفند با استفاده از روش های ایمونوبلاتینگ

doi
چکیده

هیداتیدوزیس یک بیماری شایع مشترک بین انسان و حیوان است و روش­هاي متعدد سرمي، جهت تشخيص هيداتيدوز وجود دارد که روش­های ایمنوبلاتینگ از روش­های حساس و با ويژگـي بـالا می­باشند. لذا در این مطالعه، به منظور تعیین آنتی­ژن مناسب، جهت بررسی­های سرولوژیک با توجه به سویه منطقه، آنتي­ژن­هاي پروتواسکولکس و مایع کيست هيداتيک گوسفندی با استفاده از روش­های دات­بلات و وسترن­بلات ارزیابی شد. در این بررسی تجربی، 40 نمونه گوسفندان آلوده و غیرآلوده به کیست هیداتیک از کشتارگاه اردبیل جمع­آوری شد که با معاینه پس از مرگ تایید شد. منبع آنتی­ژن، برای آزمایشات سرولوژیک، مایع خام کیست هیداتیک و پروتواسکولکس­های جمع­آوری شده از گوسفندان آلوده به طور طبیعی در کشتارگاه اردبیل بود. نمونه­های سرم با استفاده از آنتی­ژن­های نامبرده به روش دات­بلات و وسترن­بلات مورد آزمایش قرار گرفتند. سرم خون گوسفندان غیرآلوده به عنوان کنترل منفی در این ارزیابی مورد استفاده قرار گرفت. ارزیابی باندها پس از رنگ­آمیزی با کوماسی بلو در آزمون SDS-PAGE و بعد از مواجهه با سرم­های مثبت و منفی در وسترن بلاتینگ صورت گرفت. نتایج این مطالعه نشان داد که حساسیت آنتی­ژن مایع و پروتواسکولکس کیست هیداتیک گوسفندی، با روش دات­بلات صددرصد می­باشد و آنتی­ژن مایع کیست، در روش وسترن­بلات باندهای 20، 23 و 26 کیلودالتون و آنتی­ژن پروتواسکولکس فقط باند 25 کیلودالتونی را نشان داد و هیچ یک از آنتی­ژن­های نام­برده با سرم گوسفندان غیرآلوده واکنش مثبت کاذب ندادند. با توجه به نتایج حاصل، هر دو آنتی­ژن با در نظر گرفتن سویه منطقه، در تشخیص کیست هیداتیک با حساسیت بالا مناسب تشخیص داده شد.