کاربرد دنسیتومتری ژنومی برای محاسبه جمعیت نسبی باکتری اشریشیا کلی در روده ‌‌ جوجه‌های گوشتی

نویسندگان

1 گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد رشت، رشت، ایران

doi
چکیده

در این مطالعه روش دنسیتومتری برای محاسبه جمعیت نسبی باکتری‌های اشریشیا کلی در بخش‌های مختلف روده جوجه‌های گوشتی مورد بررسی قرار گرفت. پس از آماده‌سازی نمونه‌های محتویات گوارشی، فرآیند خالص‌سازی و استخراج DNA محتویات دوازدهه، ژئوژنوم، ایلئوم و روده کور صورت گرفت. با استفاده از دو جفت آغازگر رفت و برگشت، یک واکنش زنجیره‌ای پلیمراز اختصاصی جهت شناسایی اختصاصی کلیه باکتری‌های اشریشیا کلی و یک واکنش زنجیره‌ای پلیمراز اختصاصی برای شناسایی اختصاصی کلیه باکتری‌های موجود در دستگاه گوارش جوجه‌ها انجام گردید. با مقایسه و تجزیه و تحلیل باندهای مرئی شده بر اساس رویه رگرسیون خطی با برون‌یابی با استفاده از تکنیک دنسیتومتری و نرم‌افزار Gel Proc Analyzer، تراکم باندهای اختصاصی باکتری‌های اشریشیا کلی به‌دست آمد. جمعیت این باکتری در سنین مختلف هم به تفکیک بخش‌های متفاوت دستگاه گوارش جوجه‌ها تعیین شد. نتایج آزمایش نشان داد 000004/0 درصد باکتری‌های دوازدهه، 07/0 درصد کل باکتری‌های ژئوژنوم، 64/0 درصد کل باکتری‌های موجود در ایلئوم و 51/2 درصد باکتری‌های روده کور متعلق به گونه اشریشیا کلی بودند. همچنین باکتری اشریشیا کلی در چهار روزگی، 76/1 درصد کل باکتری‌ها، در چهارده روزگی 01/0 درصد کل باکتری‌ها و در سی روزگی 80/0 درصد کل باکتری‌های دستگاه گوارش جوجه‌ها را تشکیل می‌دهند. علاوه بر این معلوم شد در چهار روزگی در ژئوژنوم، ایلئوم و روده کور به ترتیب 30/0، 05/2 و 97/3 درصد کل باکتری‌ها از گونه اشریشیا کلی بوده و در دوازدهه این باکتری وجود نداشت. در چهارده روزگی هم در ژئوژنوم، ایلئوم و روده کور به ترتیب 000009/0، 00011/0 و 08/0 درصد کل باکتری‌ها از گونه اشریشیا کلی بودند و در دوازدهه این باکتری وجود نداشت. در سی روزگی هم در دوازدهه، ایلئوم و روده کور به ترتیب 00011/0، 009/0 و 40/2 درصد کل باکتری‌ها از گونه اشریشیا کلی بودند و در ژئوژنوم این باکتری وجود نداشت. به‌عنوان نتیجه‌گیری کلی شیوه دنسیتومتری مبتنی بر نتایج PCR را می‌توان روشی سودمند برای تعیین جمعیت نسبی باکتری‌های گونه اشریشیا کلی دستگاه گوارش طیور دانست.