مقایسه کیفی و کمی نتایج مربوط به چند روش استخراج DNA از ژنوم مایکوباکتریومهای بیماریزا و ساپروفیت
نویسندگان
1 دانشآموخته کارشناسی ارشد زیستشناسی- ژنتیک، دانشکده علومپایه، واحد تبریز، دانشگاه آزاد اسلامی، تبریز، ایران.
2 استادیار گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد تبریز، دانشگاه آزاد اسلامی، تبریز، ایران.
3 استادیار گروه زیست شناسی، دانشکده علومپایه، واحد تبریز، دانشگاه آزاد اسلامی، تبریز، ایران.
doi
چکیده
با توجه به اینکهنخستینمرحلهجهتانجامآزمایش هایمولکولیمانند واکنش زنجیره ای پلی مراز (Polymerase Chain Reaction; PCR)داشتن DNA کافیوباکیفیتمی باشد، هدفازانجاماینمطالعهمقایسهپنج روشمختلفاستخراج DNAژنومی مایکوباکتریوم هابه منظور معرفی بهترین روش بود. بدین منظور از پرگنه های خالص مایکوباکتریوم اویوم پاراتوبرکلوزیس به عنوان مایکوباکتریوم بیماری زا و نیز سویه ای از یک مایکوباکتریوم ساپروفیت به نام مایکوباکتریوم فلئی استفاده شد. کمیت و کیفیتDNAهای به دست آمده توسط هریکاز روش ها، به ترتیب بر اساس غلظت DNAاستخراجی (نانوگرم در میکرولیتر) در طول موج 260 نانومتر و نیز بر مبنای نسبت OD در طول موج های 280/260 با استفاده از دستگاه نانودراپ محاسبه و موردارزیابی قرارگرفت. استخراج DNA از ژنوم مایکوباکتریوم هابااستفادهازروش CTAB (Cetyltrimethylammonium bromide) بیشترین میزان و روشمبتنی بر جوشانیدن کمترینمیزانDNAرا حاصل کرد. همچنین مقایسهمیزانخلوصDNAاستخراج شدهدراینروش ها نیزنشانداد که استخراج DNA بااستفادهاز روشCTABبیشترینمیزان وروشمبتنی بر جوشانیدن بازهم کمترین میزانخلوصراداشتهاست. همچنین بین دو نوع باکتری از نظر کیفیت DNAهای استخراجشده در هیچ یک از روش های استفاده شده برای استخراج DNA اختلاف معنی داری وجود نداشت. با توجه به نتایج مطالعه حاضر به نظر می رسد که استفادهازروش CTAB یکی از مناسب ترین روش ها جهت استخراج DNAژنومیاز مایکوباکتریوم هاجهتتشخیص مولکولی آنها در نمونه های مختلفمی باشد.
