بررسی واکنش پذیری آنتی ژن نوترکیب OMP31 باکتری بروسلا با سرم بیماران مبتلا به بروسلوز جهت استفاده در تشخیص به روش الایزا

نویسندگان

1 گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی زنجان

2 گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی زنجان

3 گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی زنجان

4 گروه بیوتکنولوژی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی زنجان

doi
https://doi.org/10.82311/qjaphd.2025.1211201
چکیده

زمینه و هدف: بروسلوز یا تب مالت یک عفونت زئونوتیک باکتریایی با گسترش جهانی است که توسط گونه بروسلا ایجاد می­شود. علائم بارز این بیماری شامل تب در انسان و سقط در حیوانات آلوده می­باشد. گام اساسی در کنترل این بیماری ، شناسایی صحیح و به موقع است؛ بنابر این توسعه روش­های تشخیصی  کار­آمد حائز اهمیت است. در این مطالعه از تست الایزا بر پایه پروتئین نوترکیب OMP 31 استفاده شده است که با استناد به تحقیقات پیشین ، یک پروتئین ایمونوژن با توانایی تحریک پاسخ ایمنی و تولید آنتی­بادی مناسب می­باشد. هدف از این تحقیق بررسی میزان واکنش پذیری این پروتئین با آنتی­بادی­های IgG و IgM  موجود در سرم بیماران است. مواد و روشها: کاست ژنی طراحی‌شده در وکتور pET-28a کلون شد و به باکتری E.coli BL21(DE3) انتقال داده شد. بعد از تایید حضور پروتئین به روش وسترن بلات ، تخلیص پروتئینی به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی انجام شد. پس از تعیین غلظت، آنتی ژن بر روی پلیت الایزا کوت شده و واکنش پذیری آن با سرم بیماران و سرم گروه کنترل ، مورد بررسی  قرار گرفت. حساسیت و دقت برای هر دو نوع آنتی­بادی IgM  و IgG توسط آنالیز ROC ارزیابی شد.. نتایج: پس از بیان پروتئین ، حضور پروتئین  OMP31 نوترکیب توسط وسترن بلات تایید شده و غلظت آن به کمک آزمون بردفور37/54 میکروگرم بر میلی لیتر تخمین زده شد. حساسیت و اختصاصیت واکنش پروتئین نوترکیب با IgG و IgM موجود در سرم افراد بیمار و سالم به ترتیب 56/56 و %5/72 برای IgG ؛ و %7/75 و 79/62 برای IgM گزارش شد. نتیجه ­گیری: به نظر می رسد پروتئین نوترکیب تولید شده ، قادر به واکنش مناسبی با سرم بیماران بوده و تفاوت معناداری در میزان واکنش ­پذیری آن با گروه بیمار و گروه کنترل  مشاهده شد.