مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA کل از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی و متابولیتهای ثانویه
نویسندگان
doi
10.22092/ijrfpbgr.2014.7646چکیده
گیاهان دارویی منبع غنی از مواد مؤثره برای تولید فراوردههای دارویی هستند. جنس آویشن ( Thymus ) متعلق به خانواده نعناعیان است که بیش از 18 گونه آن در نواحی مختلف ایران پراکنش دارند. اثرات دارویی این گیاه مربوط به ترکیبات مختلف ازجمله مونوترپنهای فنولی کارواکرول و تیمول است، اما این ترکیبات فنولی و متابولیتهای ثانویه دیگر بهعنوان مشکل اصلی استخراج RNA مناسب برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و مهندسی ژنتیک محسوب میشوند. هدف از انجام این پژوهش، مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA و معرفی یک روش مناسب جهت استخراج RNA از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی بود. ازاینرو، هفت دستورالعمل استخراج RNA شامل سه روش، دو کیت و دو بافر تجاری استخراج RNAاز نظر کمیت و کیفیت RNA استخراج شده، ارزیابی و مقایسه شدند. بهمنظور ارزیابی کمیت و کیفیت RNA از خواندن جذب در طول موج 260، 280 و 230 نانومتر، محاسبه نسبت جذب 280/260 و 230/260، الکتروفورز ژل آگارز، واکنشهای RT-PCR و Real-Time PCR استفاده شد. از بین روشهای مورد مطالعه، کمیت و کیفیت RNAی استخراج شده با روش فنل/ SDSنسبت به روشهای دیگر ازجمله TRIzol ® برای هر سه گونه آویشن مناسبتر بود. از محاسن این روش کوتاه بودن زمان استخراج و ساخت دستی بافر اشباع با تریس بود که در گزارشهای قبلی بهشکل آماده خریداری شده است. در نهایت، روش فنل/ SDS تغییریافته برای استخراج RNAاز برگهای غنی از ترکیبات فنولی آویشن معرفی شد.