بررسی وجود ژنهای مقاوم به کلسیتین(mcr- pmr) در کلبسیلاپنومونیه جداشده از شیر خام با روش Multiplex-PCR
نویسندگان
1 گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم زیستی، واحد علوم تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
2 گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم زیستی، واحد علوم تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
3 گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم زیستی، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه
doi
چکیده
کلبسیلا پنومونیه باکتری گرم منفی روده ای است که سبب عفونت های بیمارستانی می شود. هدف از انجام این مطالعه بررسی ژنوتیپی ژنهای مقاوم به کلسیتین (mcr- pmr) در کلبسیلا پنومونیه جداشده از شیر خام با روش Multiplex-PCR است.از 220 تانک نگهداری شیر خام در مراکز نگهداری شیر در سال 1397 در تهران نمونهبرداری صورت گرفت. سویههای کلبسیلا پنومونیه با استفاده از آزمونهای روتین بیوشیمیایی و میکروبیولوژیکی استاندارد شناسایی شدند.استخراج DNA طبق دستورالعمل کیت تجاری مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران ( MBK0041 ) انجام شد. بعد از انجام آزمون PCR در دستگاه ترموسایکلر جهت بررسی حضور ژنهای mcr وpmr محصول نمونهها بر روی ژل آگارز 1% انتقال دادهشده و با اتیدیومبروماید رنگآمیزی و سپس در دستگاه ژل داک موردبررسی قرار گرفت.در این مطالعه به بررسی فنوتیپی و ژنوتیپی دو ژن mcr و pmr، در 60 جدایه باکتری کلبسیلا پنومونیه پرداخته شد. در این میان ژن mcr با فراوانی 11، (3/18%) و ژن Pmr با فراوانی 7، (6/11 %) گزارش شد. ردیابی دو ژن موردمطالعه با روش مالتیپلکس PCR انجام شد که به نظر میرسد این اولین موردمطالعه بر روی شیر و بررسی دو ژن mcr، pmrباشد، که در ایران از نمونههای شیر جداسازی شده از تانک نگهداری شیر در دامداریهای صنعتی از باکتری کلبسیلا پنومونیه صورت گرفته است، و دو ژن مذکور بهعنوان مارکر اصلی شناسایی شدند.