فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

در چند سال اخیر بیماری نیوکاسل در صنعت طیور خسارات گسترده‌ای از جهت تلفات و افت تولید در مزارع پرورش مرغ گوشتی، تخمگذار و مادر گوشتی در کشور ایجاد نموده است. استفاده گسترده از واکسن‌های زنده و غیرفعّال نیوکاسل سطح ایمنی را تا حد زیادی افزایش می‌دهد، امّا هنوز بیماری نیوکاسل مسئله مهمی در کشورهای در حال توسعه نظیر ایران می‌باشد. تحقیق حاضر با هدف تعیین توالی کامل ویروس نیوکاسل سویه Clone12 IR مشتق شده از سویه لاسوتا انجام گرفت. ابتدا ویروس به تخم‌مرغ جنین‌دار SPF 10 روزه تزریق شد.پس از 72 ساعت مایع آلانتوئیک جمع‌آوری شد. مایع آلانتوئیک با کمک سانتریفوژ دور بالاو گرادیانت ساکارز به صورت مناسب تخلیص شد. RNA ویروسی با کیت تجاری مناسب استخراج شد. با استفاده از یک جفت پرایمر اختصاصی (GSP) دو قطعه cDNA ساخته شد. بدون درنظرگرفتن جایگاه ژنی هفت جفت پرایمر طراحی و  ژنوم ویروس با روش PCR آمپلی‌فای شد. هر محصول PCR طولی برابر با (kb 5/2-2) را شامل می‌شد. محصول PCR از روی ژل آگارز یک درصدالکتروفورز استخراج و بر روی پلاسمید pJET1.2 به نسبت سه به یک ligate شد، در ادامه به باکتری TOP10 ترانسفورم شد. پس از تکثیر پلاسمید استخراج گردید. برای اطمینان از کلونینگ موفق آنزیم برش Bgl II استفاده شد. پلاسمیدها برای تعیین توالی به روش سنگر به شرکت تجاری معتبر ارسال شد. در نهایت با استفاده از نرم‌افزار مگا5، تمام 15186 نوکلئوتید تعیین توالی گردید. و در Gene Bank با کد  MH247189 به ثبت رسیده و قابل دسترسی می باشد. ORF شروع و پایان هر ژن مشخص شد.