بررسی تأثیر استفاده از محیط کشت حاوی ژل پلاکتی در سلامت سلولی و بیان ژنهای PAX6 و RPE65 در سلولهای رنگدانه دار شبکیه انسان
نویسندگان
1 گروه هماتولوژی آزمایشگاهی و بانک خون، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2 مرکز تحقیقات مهندسی بافت چشم، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران
3 گروه فیزیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه شاهد، تهران، ایران
4 گروه هماتولوژی آزمایشگاهی و بانک خون، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
doi
10.22070/daneshmed.2020.2973چکیده
مقدمه و هدف: تخریب اپیتلیوم رنگدانه دار شبکیه انسان (hRPE) در خلال برخی اختلالات از جمله افزایش سن با تضعیف شدید در عملکرد گیرندههای نوری چشم همراه است. پیوند سلولی و بافتی لایه RPE از گزینههای درمانی است که در سالهای اخیر مورد توجه قرار گرفته است. استفاده از ژل پلاکتی تأثیرات مفیدی بر رشد سلولهای مختلف کشت داده شده نشان داده است. این مطالعه به منظور بررسی تأثیر سه غلظت مختلف ژل پلاکتی بر زنده ماندن و بیان ژنهای PAX6 و RPE65 سلولهای اپیتلیال رنگی شبکیه انسانی کشت شده (hRPE) انجام شد. مواد و روش ها: سلولهای hRPE استخراج شده از چشم انسان در صفحات حاوی ژل پلاکت (PL) با غلظتهای مختلف (10٪،20٪ و30٪) کشت داده شدند. زنده ماندن سلولها با آزمون MTT مورد آزمایش قرار گرفت و بیان ژن های RPE65 و PAX6 با استفاده از روش Real-PCR انجام شد. نتایج با نمونه کنترل کشت داده شده در FBS مقایسه گردید. میزان تغییرات بیان هر ژن در تیمارهای مختلف نسبت به کنترل و با توجه به ژن داخلی GAPDH بر طبق روش2-∆∆Ct مقایسه شد و نتایج به دست آمده در قالب نمودار ستونی با یکدیگر مقایسه شدند. نتایج: هفت روز پس از شروع کشت عملکرد و رشد سلولهای RPE بصورت معنی داری (05/0>P) در ژل30% پلاکتی بالاتر از ژل پلاکتی10% بود. بیان ژن RPE65 نیز در کشتهای تیمار شده با ژل 20 و 30% بصورت معنی داری (05/0>P) بیشتر از کشتهای حاوی ژل سرم گاوی بود، اما تفاوت آماری از نظر بیان ژن PAX6 بین نمونه های کشت داده شده در درصدهای مختلف از ژل مشاهده نشد. نتیجهگیری: مطالعه حاضر نشان داد که استفاده از ژل پلاکتی سبب بهبود ماندگاری و حفظ ماهیت سلولهای RPE کشت داده شده میشود. نتایج این مطالعه برای بهینه سازی برنامه ریزی سلول درمانی در آینده امیدوارکننده است.