فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

باکتری Aeromonas hydrophila یکی از مهم‌ترین باکتری­های بیماری‌زای ماهی است که سبب سپتی‌سمی هموراژیک، آب آوردگی محوطه شکمی و مرگ و میر در سنین متفاوت و در گونه­های مختلف ماهی به ویژه کپورماهیان می­شود. ایمن‌سازی یکی از روش­های مناسب برای پیشگیری از این بیماری است. استفاده از سازه‌های ژنی حاوی آنتی‌ژن‌های اختصاصی باکتری‌ها در سال­های اخیر به منظور توسعه واکسن‌هایی با کارایی بالا و استفاده در روش‌های آسان‌تر مانند تجویز خوراکی در آبزی‌پروری توسعه یافته است. در مطالعه حاضر، پروتئین aopB سیستم ترشحی تیپ III باکتری A. hydrophila جدا شده از کپورماهیان استان خوزستان به منظور طراحی یک سازه ژنی مدل واکسن DNA در پلاسمید یوکاریوتی بیانی pCDNA3.1 همسانه‌سازی شد. در این پژوهش از جدایه­ باکتری A. hydrophila که از ماهیان کپور مبتلا به سپتی­سمی آئروموناسی در مزارع پرورشی استان خوزستان جداسازی و با روش مولکولی و فنوتیپی تایید شده بودند، استفاده شد. توالی ژن aopB از بانک ژن NCBI استخراج و ناحیه کد کننده ژن با استفاده از آغازگرهای حاوی نواحی برش آنزیم­های EcoRI و NheI تکثیر شد. سپس محصول PCR در پلاسمید بیانی یوکاریوتی pCDNA3.1-HisA الحاق و با استفاده از شوک حرارتی به باکتری TOP10-F' انتقال داده شد. پس از غربالگری کلون­های مثبت با استفاده از کلونی PCR و تعیین توالی، سازه ژنی pCDNA3.1-AopB با استفاده از روش الکتروپوراسیون به سلول­های CHO منتقل و بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از روش وسترن بلات در لیز سلولی ارزیابی شد. نتایج PCR و تعیین توالی سازه ژنی نشان دهنده همسانه‌سازی ژن aopB به طول تقریبی 1000 جفت باز در پلاسمید pCDNA3.1-HisA بود. آزمون وسترن بلات با استفاده از آنتی‌بادی ضد HisTag وجود یک پروتئین با وزن مولکولی حدود 36 کیلودالتون را نشان داد. در مجموع، سازه ژنی pCDNA3.1-AopB حاوی ژن aopB طراحی و مورد تایید قرار گرفت. از این سازه ژنی می‌توان در مطالعات بالینی به منظور بررسی ایمنی‌زایی در کپورماهیان در بیماری‌زایی تجربی با A. hydrophila استفاده کرد.